DIOXINAS

Resumen del método de Bioensayo XDS-CALUX

Las muestras son extraídas utilizando protocolos de extracción estandarizados para cada tipo de matriz. El extracto crudo es concentrado, resuspendido en un solvente orgánico y sometido al proceso de limpieza licenciado por ACTIVAQ a la empresa XDS International, el cual utiliza columnas de sílica ácida y XCARB.

La metodología de ensayo está basada en el Método EPA 4435: Method For Toxic Equivalents (TEQS) Determinations For Dioxin-Like Chemical Activity With The Calux® Bioassay y consta de las siguientes etapas:

• Extracción de la muestra
• Limpieza de la muestra
• Preparación e inoculación de los cultivos celulares
• Lecturas de Bioluminiscencia

Las muestras son extraídas utilizando procedimientos de extracción estandarizados para cada tipo de matriz.
El extracto crudo es concentrado, resuspendido en un solvente orgánico y sometido al proceso de limpieza licenciado por ACTIVAQ a la empresa XDS International, el cual utiliza columnas de sílica ácida y XCARB (carbón activado).

La fracción de dioxinas/ furanos es obtenida por separado de la fracción de dL-PCB’s utilizando la metodología licenciada.
Las fracciones obtenidas son resuspendidas en DMSO e inoculadas en placas de cultivo de 96-pocillos.

En cada placa es incorporado una dilución seriada del estándar certificado 2,3,7,8-TCDD como control positivo para generar la curva de calibración.

A las 24 horas de incubación se mide la actividad de la luciferasa, a través de la emisión de luz en cada pocillo donde fueron inoculadas las muestras. Esto se compara con la curva estándar incluida en la ronda de análisis para establecer la cantidad total de Equivalentes biológicos (EQB).

A continuación, se presenta imágenes de nuestro proceso:

La ventaja es que es un método analítico rápido que permite analizar un elevado número de muestras, a bajo costo (40-60% del valor de técnica estándar HRGC/HRMS), permitiendo tomar decisiones oportunas. Es la única técnica con exactitud y sensibilidad cercana a HRGC/HRMS (partes por trillón, ppt ó pg/g). Tiene reconocimiento Internacional (aplicada en USA, Europa y Japón)